動物實驗及設施設備操作規程
一、人員、物品、實驗動物進出中心設施操作規程
（一）人員進出屏障設施操作規程
1🧏🏿♀️、進入實驗動物中心的人員包括:實驗人員、實驗動物中心工作人員、實驗動物中心管理人員，其他無關人員未經批準不得入內🈵🤑。
2🧎🏻♂️➡️、屏障環境更衣室和汙物走廊嚴禁將兩扇門同時打開,人員進出要隨手關門👉🏽，嚴格按照入室流程圖所示方向和要求單向流動🧘🏿♀️，禁止逆向返回。
3👋🏻、持校園卡進入二樓實驗動物中心，更換拖鞋🕟，存放個人物品。
4🪼、所有進入屏障環境動物實驗室的人員必須填寫《人員進出屏障環境設施登記表》9️⃣，登記人員信息、進入時間🤦🏼♀️。
5、入室人員登記完後，進入第一更衣室，關好第一道門，戴手套、口罩 、穿防護服，將門禁卡套在袖口。
6、實驗人員進入第二更衣室，關好第一互鎖門，帶鞋套，整理著裝🥶。
7、進入緩沖室，關好第二互鎖門👰🏽♂️，並用消毒液進行手消毒。
8👎🏻🧑🏿🚒、關好第三互鎖門,進入屏障環境設施的潔凈走廊，實驗人員根據需要進入各實驗室或功能室進行各自的操作。
9、各項操作或任務完成後實驗人員將汙染物🐼、廢棄物通過汙物走廊帶離屏障環境設施進入普通環境設施，將口罩🧉、手套、鞋套、防護服☪️、舊鼠籠均放置在清洗消毒室指定桶內，藥品等實驗用品放入指定冷藏箱🧔🏼♂️，做好標記，填寫記錄表🧑🦼➡️。
10🤌、進入動物中心門口緩沖室填寫《人員進出屏障環境設施登記表》登記離開時間🔍，取走個人物品，更換拖鞋📴，填寫《實驗動物記錄表》🌍，離開實驗動物中心𓀜。
（二）物品進出屏障設施操作規程
1、進入屏障動物室的物品必須是經由高壓滅菌、紫外線照射、消毒劑浸泡後的無菌物品。
2、可清洗物品在消毒滅菌前必須進行徹底的清洗;未經滅菌消毒物品禁止入內。
3🌰、可以高壓滅菌的物品需經脈動真空滅菌器滅菌後進入，從內儲存室取出後待用🧑🏻♌️。走向:清洗消毒室→脈動真空滅菌器→內儲存室🚣🏿。
4、不可高壓滅菌的物品需經清洗消毒室的傳遞窗消毒後進入，從內儲存室取出後待用。走向:清洗消毒室→傳遞窗→內儲存室🧝🏿。
5🛀🏻👩🏻🌾、消毒滅菌過的物品貯存時間不宜過長，一般在7天內用完。
6、嚴禁同時打開高壓滅菌器♝👱🏽♀️、傳遞窗兩側的門或蓋子🈷️。
7、使用後的物品需經過屏障環境的汙物走廊退出屏障環境。走向:使用後的物品→汙物走廊→清洗消毒室（普通環境）🧍🏻。
8、實驗人員使用的防護服、工作鞋、口罩🦩📯、手套、鞋套🧑🏼🤝🧑🏼、藥品等隨人員一同退出，放入指定的回收地點。走向:防護服👨🏼💻、工作鞋☸️、口罩、手套、鞋套、藥品→汙物走廊→清洗消毒室、動物解剖室。
（三）動物進出屏障設施操作規程
19️⃣、動物進出流向👩🏼🚀：外環境→動物接收室→傳遞窗→動物檢疫室。
2、實驗人員購買動物時➖，必須從持有《實驗動物生產許可證》的單位購買具有《實驗動物質量合格證》的動物👫🏻✦。運輸動物的籠具必須與動物等級的潔凈要求相符合👨🏿🦰，並滿足通風換氣、搬運、碼放等使用要求。
3👂🏻、實驗人員將動物運到實驗動物中心門口，填寫《實驗動物購入記錄表》🛍️，提交《實驗動物生產許可證》📮👵🏿、《實驗動物質量合格證》，工作人員確認無誤後🧑🏿⚖️，將運輸籠外包裝用消毒液擦拭幹凈放入動物接收室。
4、打開運輸籠，仔細檢查動物的外表有無異常🤾🏽♂️，判定動物質量好壞。肉眼評判動物質量優良的標準是：營養良好🧛🏻🦥，肥瘦適中；發育正常🤦🏻♂️，肢體勻稱並無殘缺或畸形；體質健壯，運動活潑👨👨👦；被毛光亮🥾、色正🚣🏻♀️🦜，緊貼身體🙍🏿♀️；皮膚彈性良好，無創傷和異常物；天然孔無異常分泌物或排泄物。
59️⃣、發現動物不健康時🌟，應拒收整批動物，並報告獸醫；未見異常時👨❤️👨，方可接收動物。接收動物時🚶♂️🤟🏻，工作人員用清潔籠具將動物從傳遞窗轉入檢疫室（不得將運輸籠傳入清潔區）🦹🏼♂️。接收動物後，將驗收結果如實記錄在《實驗動物進入屏障環境設施登記表》上，並請實驗人員簽署意見。
6、動物在檢疫室的觀察期為3-7天。工作人員每天應密切觀察並記錄動物的基本狀況，發現異常情況，應隨時報告獸醫或有關人員👨🏻🏫，經觀察確認無異常後👩🏿🍼，轉入飼養室進行飼養💓。
7🚁、死亡🤛🏽、淘汰動物和和需帶走動物均須經汙物走廊帶出屏障環境🙋♂️🪭，並且填寫《動物實驗記錄表》➡️、《實驗動物處理登記表》，必要時🤷🏽，於解剖室按照有關SOP進行必要的解剖和取樣，處理後的動物屍體和處死淘汰動物屍體放到指定冰櫃保存🚺。
（四）人員進出普通環境設施操作規程
1⚫️、進入動物室的人員包括:實驗人員💆🏿♀️🙎🏻♀️、實驗動物中心工作人員、實驗動物中心管理人員🧖🏽，其他無關人員未經批準不得入內。
2、人員進出要隨手關門⬇️，嚴格按照入室流程圖所示方向進入。
3🧑🏿⚕️、持校園卡進入二樓實驗動物中心，更換拖鞋🃏，存放個人物品。
4、所有進入普通環境動物實驗室的人員必須填寫《人員進出普通環境設施登記表》，登記人員信息🤟🏻、進入時間🧑🏿💼。
5🤽♂️、入室人員登記完後🛣，進入第一更衣室🧠，戴手套、口罩，穿白大衣(自帶) ,關好第一互鎖門👶🏻，用消毒液進行手消毒👨🏭，關好第二互鎖門，進入普通環境設施。
6🎉、實驗人員根據需要進入各動物室或功能室進行各自的操作。
7、各項操作或任務完成後🍞，實驗人員將汙染物、廢棄物等按原路返回帶走，並將手套🕚、口罩，白大衣放到清洗消毒室指定位置，離開普通環境設施💁🏽♀️💃🏿。
8、進入動物中心門口緩沖室填寫《人員進出普通環境設施登記表》登記離開時間🧑🏻🎄，並取走個人物品，更換拖鞋，填寫《動物實驗記錄表》，離開實驗動物中心。
二、實驗動物中心主要設備操作規程
（一）脈動真空蒸汽滅菌器操作規程
1、使用前
（1）首先確認電源🎿、水源🕓、壓縮空氣源。
（2）打開配電箱中的控製設備的電源開關，打開空壓機的控製開關，打開水源閥門，觀察各壓力表的指示是否正常。
（3）觀察各管道有無泄露，閥門有無異常
2📼、使用中
（1）打開設備上的電源開關，點亮觸摸屏👷♂️，這時設備自動加水👾，水位到後，自動加熱👰🏻♂️，產生蒸汽壓力，並使設備預熱🙅🏽♂️。
（2）選擇所使用的滅菌程序，待夾層壓力達到0.21MPa後🧑🏽🏫，繼續預熱15分鐘⚖️，將需滅菌物品放入鍋內，待觸摸屏顯示蒸汽壓力通後👩🏿🏭，點觸摸屏上門操作窗口✊🏻，關閉設備前門🚕，按啟動鍵設備進入自動工作狀態🍡。（註🏌🏿♂️：關閉大門前👨🏿🚀，應先檢查門膠條是否全部復位⛸，門框是否清潔🏉。）設備運行中，要密切觀察設備的運行狀況👩🏻🦼➡️，不得使設備處在無人監管的工作狀態下🚟。
（3）滅菌結束後🩺，蜂鳴器報警🔛，待室內壓力歸零後，按後門操作鍵，點擊設備後門開門鍵🔶，待門槽真空後，按住開門鍵至門開，取出滅菌物品，關閉設備後門，如繼續使用🤠，請重復上述程序🏭。（註：B、D程序滅菌結束後只能開前門🧕🏼，後門是打不開的）
3、使用後
（1）關好設備大門，關閉電源開關
（2）關閉水源閥門，關閉空壓機開關，關閉控製總電源開關🚂。
（3）待夾層壓力將至0.03MPa後🤸🏻，打開排泄閥門，排掉蒸汽發生器裏剩余的水和蒸汽，待排凈後，應隨手關閉此閥。
註：在設備運行過程中，必須有專人密切觀察設備的運行情況，如發現有異常情況，應立即關掉所有控製電源開關，認真檢查是何種原因造成的。如不能自行處理♙，請與廠家辦事處聯系。電話：18633817958（馬長利）🫖。設備應保持清潔，尤其是內室更應潔凈🤽🏿♀️。
（二）RY-Ⅱ-500L雙級反滲透製水系統操作規程
RY-Ⅱ-500反滲透系統主機是RO水處理系統的中心環節🎱，一般主機之前有響應的前處理設備🕴🏻📥，之後有響應的後處理裝置（飲用水一般用紫外線儀處理後即能保證直接飲用）。首先應該對系統的預處理進行沖洗和反沖洗，步驟如下：
1👵🏼、開機
（1）確認水源有水🤹🏿♀️，原水閥門開啟👩🏼🦲；確認預處理各閥門都在運行檔位置；
（2）第一次開機應把設備面板左右面的調節閥調到最大，為防止廢水量太小或沒有造成系統傷害。開啟一配電面板部分系統開關到自動🩺👨🏿，則原水泵指示燈亮、進水電磁閥指示燈亮👨🏻🦼➡️，隨後高壓泵運行指示燈亮、沖洗電磁閥指示燈亮，進行開機膜沖洗🤑。
（3）沖洗完畢後系統將自動切換到製水運行狀態，電源指示燈亮、進水電磁閥指示燈亮，一級高壓泵運行指示燈亮、沖洗電磁閥指示燈滅🫴🏼👩🏻🎤，延時後二級高壓指示燈亮，泵運行🏢。
（4）調節面板右方一級調節閥並觀察產水、濃水流量和膜前、膜後壓力，使工作壓力在0.8—1.0MPa之間，廢水比在1：2.5—1🔧：4之間。隨後調節左側二級濃水調節閥🧘🏻，使工作壓力在0.8—1.0MPa之間。
（5）系統有低水壓保護（低水位保護）和高水位保護功能💂🏽；當水源停水或低於進水要求水壓時🙇🏽♀️，即使打開“系統開關” 系統中的低壓控製閥將不會給系統指示，泵不會啟動🎸，系統不會運行。當系統水箱註滿水後，儲水裝置中的感應器將給控製系統信號🏄，控製系統收到信號後將自動斷電𓀇，系統一級設備部分將停止運行。當儲水裝置水位下降一定高度（根據用戶要求可以任意設定）後，感應器又會給系統信號🛁，系統自動通電運行製水👩🏼🦳。
2💁🏿♂️🧜🏼♀️、關機
（1）整個系統為全自動控製，需要製水或純水箱水滿是設備將自動開啟和自動停機💆🏼。
（2）要手動停機時🤽🏿，關閉面板上的系統開關到停止位置🦌，整個系統將會停止運行⬜️🚕，再根據用戶需要可關閉進水開關。
3🛋、註意事項
（1）操作員上崗要求⛹🏽👩🏿🏫：
a) 有水處理系統操作經驗或經過正式的操調試、培訓，熟悉水處理工藝流程及工作原理；
b) 了解基本的水質分析及水質檢驗知識；
c) 愛崗敬業、工作認真、細心負責🧃，做好運行記錄和交接班工作。
（2）純凈水處理系統工作間衛生要求：
d) 工作間應潔凈整齊，墻面地面應達到無塵要求🛃，設備🫢🎎、管路🏊♀️、儲水裝置🤳🏼、各泵表面潔凈，水溝保持無雜物🎫；
e) 應每天定時和不定時進行衛生打掃；
f) 操作間門窗為常關狀態📁🐒，進出隨手關門，非操做人員不應進入操作間👐🏿；
g) 非工作狀態下，要關閉照明燈。
（三）工藝條件
1、操作間溫度：10—45℃ 最佳溫度🤥：25℃±5℃；
2、進水壓力：0.25 Mpa—0.4Mpa；
3、膜前壓力為0.8—1.0 Mpa；
4🪥、凈水產水管路水壓應為0，即無阻力出水👍🏻；
三、中心日常環境維護和消毒
（1）物品消毒
原則：凡耐高壓物品，均采用高壓消毒的方法。包括飼料、墊料🚄🏕、籠具🤸、水、水瓶👩👦、隔離衣等👨🏻🔬。不能高壓物品，擦拭幹凈，用消毒夜浸泡後，再由傳遞窗進入飼養室準備間。
方法🧚🏿：將分裝好的飼料👮♀️💗、墊料🧖♀️🤰🏿、水等物品，由外門放入真空滅菌器內，關好門，設定好程序🤷🏿👷🏿♂️，檢查無誤後，啟動滅菌器🪰，待程序結束後，由內門將消毒物品直接移入飼養室，關好內門。
（2） 籠具架
a.先將籠具架用中性洗潔液擦拭，擦凈汙漬，再用清水沖凈，最後抹布擦幹。可以高壓蒸汽滅菌的籠具架用高壓蒸汽滅菌。預真空高壓蒸汽滅菌器參數為脈動3次、132℃滅菌4分鐘，幹燥2分鐘🅾️。
b.不能高壓蒸汽滅菌的籠具架擦拭幹凈💆🏻♀️、消毒液表面消毒三遍後進入。
（3） 飼養盒和墊料
a.先清除盒內的汙物，用水將盒的內外壁沖洗幹凈，晾幹。
b.在適當位置放指示卡，註意飼養盒之間應留有縫隙，然後進行高壓滅菌。滅菌參數為脈動3次🤵🏿♀️，132℃4min，幹燥2min👵🏻。
c.滅菌完畢後🍔，應確認滅菌效果達到要求🤱🏿，再將飼養盒放到消毒後室，貼上標簽，標明消毒日期。存放時間不超過7d🕵🏻♂️。
（4） 墊料
a.墊料應選擇無毒性、無異味、無油脂、吸濕性好、粉塵少的材料。
b.墊料過篩後分裝入鼠盒中,每盒2-3cm厚。6個盒子一摞，每摞最上層盒子不裝墊料。置於高壓蒸汽滅菌器滅菌室中😿。關閉高壓鍋門，滅菌參數為脈動3次、132℃滅菌5min👩🏼🏭1️⃣、幹燥3min👍🏻。滅菌後的墊料貼上標簽🩻，標明滅菌日期🪡。存放於消毒後室。存放時間不超過7d🈵。
（5） 飲水瓶
a.清除飲水瓶裏的剩水🛜，清水沖凈🚣🏿。將其置於容器中🌙，放入指示卡。
b.滅菌參數為脈動3次、132℃3min🐐𓀄、幹燥2min。
c.檢查指示卡的顏色，確認滅菌效果達到要求🏂，貼上標簽🏬，標明滅菌日期，放在消毒後室。存放時間不超過7d。
（6）飲水
a.將水瓶充分洗凈後，擺放入盒，然後瓶中裝入無菌水，將瓶塞歪放在瓶口上，不要蓋緊。在水瓶的適當部位貼上指示卡🛩。然後放入高壓蒸汽滅菌器進行滅菌。滅菌參數為置換20min、125℃30min🚊。
b.滅菌後，查看指示卡的顏色，確認滅菌效果達到要求😞，將飲水瓶蓋子蓋緊🤘🏽，直接放入飼養室。存放時間不超過7d。
（7） 飼料
首先檢查飼料是否腐敗、變質，確認質量合格後，將飼料分裝成小袋🍋🟩👶🏿，隨機在兩袋中放置指示卡，紮好袋口，高壓蒸汽滅菌器滅菌室內上下層各放置一袋🦑，袋與袋之間要有充分的空隙。關閉滅菌器門，滅菌參數為脈動3次🤽🏻♀️、132℃滅菌4min、幹燥5min♕。標明滅菌日期🙍🏼♀️。存放時間不超過7d。
（8）衣服、毛巾
a.用中性洗滌劑洗凈衣服、毛巾👩🏻🦽，清水沖洗幹凈👬🏻😖，晾幹，疊整齊。
b.將衣服🤵🏿、毛巾根據尺寸大小分開並用雙層布袋包裹嚴密，將指示卡隨機插入衣服袋中。滅菌參數為脈動3次🔵，132℃4min，幹燥4min。
c.檢查指示卡顏色👨🏿🎨，確認滅菌效果達到要求，置於第二更衣室衣櫃中。
（9） 新購置的物品
a. IVC🔠📔、籠具架等大型物品在一樓拆去包裝🔲，檢查有無昆蟲，然後搬至專用區域👨🏼🔧，進行安裝、消毒🐽👲。
b.消毒時🎆，將籠具架的軲轆泡在消毒液中🦗，籠具架表面用消毒液擦拭。一般可用季銨鹽類消毒液如新潔爾滅🧘🏿♀️，也可以用百毒殺等🐟。擦拭完畢噴霧消毒。再次檢查其表面是否還有汙物🧑🏻✈️💆🏻、昆蟲等🔀，然後進行第二次噴霧消毒。搬至潔凈區入口處進行第三次噴霧消毒。
c.其它物品進入均按相應操作規程♑️📭。
（10） 物品的定期消毒
a.籠具架在每次更換墊料時用2～3％新潔爾滅或0.5%百毒殺消毒液擦拭🚘。
b.手消毒液定期更換。
c.室內排氣口的初效過濾器每周清洗一次👩🌾，然後用上述消毒液浸泡🗡，瀝幹水分後重新裝上㊙️。IVC的初效過濾介質每周清洗消毒一次。
d.傳遞窗每次使用後用消毒液擦拭，紫外燈照射15min。
e.飲水瓶、飼養盒每周高壓滅菌1次🦧，飼養盒蓋每月高壓滅菌一次🧜🏻。
（11） 環境清潔消毒
動物實驗室臺面、地面及走廊每日工作後用抹布和墩布擦拭一次🥏，每周一和周四用1％甲酚皂消毒液或0.1％新潔爾滅溶液擦拭或0.5％過氧乙酸噴霧消毒一次；三種消毒每三周更換一次，交替使用。周邊環境衛生區每天打掃🎏，拖地，每周至少消毒兩次。紫外燈每天早晚開啟兩次，每次15分🎨，不能與日光燈同時開啟。
（12） 實驗用儀器設備的清洗消毒
a.實驗用的分析儀器和設備使用完畢後，用綢布擦拭後再用棉球蘸取75％酒精擦拭一次。
b.實驗中所用的器皿應潔凈👩🏽🚒，其內壁應能被水均勻的潤濕而無水的條紋且不掛水珠。
c.實驗中的燒杯🛀🏿、錐形瓶、量杯等一般的玻璃器皿在實驗完畢後😫，用2％洗滌靈或1％洗衣粉刷洗🧙🏽，再用水沖洗幹凈，然後用水洗2～3次。
d.滴定管🤸👩🚒、吸管➖🤨、容量瓶等器皿使用後用洗液浸泡4小時，取出後用水沖洗幹凈👩🏼🦰，然後用純化水潤洗2～3次備用。
（13） 清潔液的配製
a. 2％洗滌靈液的配製：取洗滌靈20ml，加水至1000時👐🏽🟥，做為清洗用。
b. 1％洗衣粉的配製🫷🏻：取洗衣粉30克，加水至3000ml🈷️，做為洗滌用🙎🏻♂️。
c. 洗液的配製👨🏫：稱取重鉻酸鉀80克🔮，加少量蒸餾水加熱🫡，使其溶解🤷，待半冷後，緩慢加入濃硫酸液100時，然後加蒸館水至1000ml即成。采取此方法製備時一定要註意安全，切不可把重鉻酸鉀的水溶液加入濃硫酸中，以免引起發熱導致爆炸事故🟰。
（14） 消毒液的配製
a.75%酒精溶液🧝🏻♀️：取95%酒精80ml🫶🏼，加20ml水至100ml，即為75%酒精溶液。用於儀器設備擦拭消毒👮🏼♂️。
b.0.1%新潔爾滅消毒液：取5%新潔爾滅溶液20ml，加水至1000ml🚢，即為 0.1%新潔爾滅溶液。用於室內空氣、物品等噴霧消毒。
c.0.5%過氧乙酸溶液：取20%A液及B液各50ml，加水至1000ml🦄，即為0.5%過氧乙酸溶液♈️。用於室內空氣、物品等噴霧消毒。
d.0.5%84消毒液：取84消毒液12.5ml🕰，加水至2500ml，即為0.5%84消毒液。用於噴灑🧖♂️、噴霧等消毒。
e.0.05%癸甲溴銨溶液（百毒殺）：取5ml癸甲溴銨溶液🗺，加水至1000ml（1L），即為0.05%癸甲溴銨溶液🫱🏼。用於室內器具噴灑等消毒🦹🏽♂️。
註意事項：各類消毒液配製完成後🐩，要註明名稱、濃度🧑🏻🤝🧑🏻、配置日期🧯，及時更換，保證其有效濃度🌺，各類消毒液互換使用。
（15） 每次洗刷消毒須填寫記錄表。
（16） 環境控製
實驗期間每天記錄環境溫濕度情況👩🏻⚕️。
屏障環境要求：溫度20℃～26℃範圍👌🏽；相對濕度40％～70％👩🏽🎨。
通風換氣🤲🏻：合理安排籠架位置🤞🏼，保持室內空氣新鮮。氨濃度應小於14ppm，硫化氫含量應低於0.0001％。及時更換過濾介質，初效每周更換二次，中效每月更換一次✍🏻。
（17）設備管理
空調開啟時，每周將空調濾塵網沖洗一次，晾幹後再用🏄。禁止空調超負荷運轉。
水管、暖氣管道應每周檢查一次，發現問題及時解決。
（18）操作失誤及補救措施
人員進入時🧑🏭，忘記換拖鞋🤳，把拖鞋重新消毒🐈，受累區域重新消毒👨🏿💼。
飼料高壓過度，發黑炭化，或有發黴時，應廢棄不用。
（19）工作日程安排
|
時間 |
上午 |
下午 |
|
周一 |
加水加料⛵️，環境衛生清掃消毒 |
清洗防護服 |
|
周二 |
加水加料，更換墊料、消毒 |
清洗防護服 |
|
周三 |
加水加料，高壓消毒 |
清洗防護服 |
|
周四 |
加水加料，消毒籠具、更換墊料 |
清洗防護服 |
|
周五 |
加水加料✍🏿，更換墊料🎡、消毒 |
清洗防護服 |
|
周六 |
加水加料，高壓消毒 |
清洗防護服 |
|
周日 |
加水加料，高壓消毒 |
清洗防護服 |
四🔺、屏障設施日常維護規程
（1） 過濾層清洗要求
①初效箱內初效濾層清洗要求：必須在系統待機狀態時更換初效
無紡布，主要是根據系統使用狀況及季節氣候變化情況，一般清洗更換期3天一次，同時清理箱內塵土。
②動物實驗室內各個回風窗內過濾網清洗要求：必須在系統待機狀態時更換🧍，主要是根據實際情況，見臟時及時取下沖洗幹凈後即可裝上。
（2） 中效過濾袋更換要求
必須在系統待機狀態時更換中效過濾袋。主要是根據系統實際使用狀況🚻，一般更換期為1個月一次2️⃣，同時清理箱內塵土🧑🤝🧑。
（3） 動物實驗室內各高效過濾器更換要求
在初🏊🏿👨🏼🚒、中效過濾層確保良好的保護狀態下，一般使用周期為3年更換一次。
（4） 每次更換過濾器須填寫記錄表👨🏼🎨。
（5）屏障設施開、關操作程序
① 系統開啟操作步驟🕷：
冬天：依次開啟總電源、開水泵、開啟風機、開啟電加濕。
夏天：依次開啟總電源👆🏽、開水泵🤽🏽、開啟風機、開啟風機壓縮機⛏、開啟製冷壓縮機。
② 系統關閉操作步驟👨🏿🏫：
依次關閉：關閉空調機組、關水泵🐕🦺、分離總電源。
五、開展動物實驗的操作規程
1、 動物實驗前的準備
（1） 實驗設計
①動物的選擇。在前人所做工作的基礎上選擇與自己實驗相匹配的合格動物🤽🏽♂️。
② 造模方法👆🚵🏻♂️。選擇造模方法製作的模型應與人類疾病具有相似性，並且具有重復性、可靠性、適用性和可控性🤵🏿♂️，另外還要經濟😡、宜行。
（2） 動物及環境
① 環境的準備🧑🏻💼。在引入實驗動物之前必須嚴格控製實驗動物飼養室及實驗室的環境條件。按照不同動物或不同等級動物對環境的不同要求調整環境的各項指標。另外，如果實驗動物是由外地購入，應註意運輸環境的溫度、濕度、飲食及通風，防止途中實驗動物被汙染或窒息死亡🔖。
② 飼料的準備。直接購入成品飼料或按照有關配比自製飼料，要求所備飼料要滿足動物的各個時期或不同微生物等級動物的不同需要🤼♂️。
③ 動物的準備。在購入或領取動物時，應註意向供應部門索取以下資料🔔：a.品種、品系及亞系的確切名稱👳🏿♀️；b.遺傳背景及其來源；c.微生物檢測狀況◼️♗；d.合格證書；e.飼育單位負責人簽名🧑🏻🦼。
2、 實驗動物的抓取和固定
（1） 小鼠🕵🏽♂️：通常用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其他粗糙表面上，在小鼠向前掙紮爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚😟，將小鼠置於左手掌心，無名指和小指夾其背部皮膚及尾部🎨，即可將小鼠完全固定。在一些特殊的實驗中🚴🏿，如進行尾靜脈註射時🧑🦰，可使用特殊的固定裝置進行固定🦹🏼♂️，如尾靜脈註射架或粗的玻璃試管等。如要進行手術或心臟采血，應先行麻醉再操作。如進行解剖實驗則必須無痛處死後，固定於蠟盤再進行。
（2） 大鼠：輕輕抓住大鼠尾巴提起🧘🏻，置於實驗臺上🏃➡️，用玻璃鐘罩扣住或置於大鼠固定盒內🏭👨🏽✈️，這樣即可進行尾靜脈取血或註射。如要做腹腔註射或灌胃等操作時🚵🫄🏼，實驗者應戴上棉紗手套（有經驗者也可不戴），右手輕輕抓住大鼠的尾巴向後拉𓀏，但要避免抓其尖端🍘🤹，以防尾巴尖端皮膚脫落✉️。左手拇指和食指握住大鼠頸部，註意用力適度，防止大鼠窒息，將大鼠尾巴夾在左手無名指和小指之間🏟，即可將大鼠固定在左手中，右手進行操作🤞🏼🧏🏻。
（3） 豚鼠：先用手掌扣住豚鼠背部🧛🏿♂️，抓住其肩胛上方，將手張開，用手指環握頸部，另一只手托住其臀部，即可輕輕提起、固定。
（4） 家兔🧛🏻♀️：先輕輕打開籠門，勿使其受驚，隨後手伸入籠內，從頭前阻攔它跑動。然後一只手抓住兔的頸部皮毛🦶🏻，將兔提起🌀，用另一只手托其臀部，或用一只手抓住背部皮膚提起來👨🍼，放在實驗臺上，即可進行采血、註射等操作。
36️⃣、 實驗動物的給藥、采血和處死操作要求
（1）實驗動物給藥
①註射給藥法
a.皮下註射⌚️：註射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚📋，右手持註射器將針頭刺入，把針尖輕輕向左右擺動，容易擺動則表明已刺入皮下，然後註射藥物✪。
b.皮內註射：將動物註射部位的毛剪去🍎，消毒後，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內，然後使針頭向上挑起並再稍刺入🔥，即可註射藥液。註射後因局部皮膚缺血，在註射部位可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘，為防止藥液外溢🙁，最好使用棉簽輕按片刻。
c. 肌肉註射：註射時針頭要垂直快速刺入肌肉🦸♂️，如無回血現象即可註射。
d. 腹腔註射：先將動物固定🦵🏼，腹部用酒精棉球擦拭消毒，然後在左或右側腹部將針頭刺入皮下🤽🏻♀️，沿皮下向前推進約0.5cm，再使針頭與皮膚呈45°角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時有落空感，回抽無腸液🫅🏿、尿液後，緩緩推入藥液。
e.靜脈註射🎽：
小鼠、大鼠的靜脈註射：常采用尾靜脈註射👩🏼🏫。操作時🐕🦺，先將動物固定在暴露尾部的固定器內，用75％酒精棉球反復擦拭使血管擴張，並可使表皮角質軟化👩🏽🍳，以左手拇指和食指捏住鼠尾兩側，使靜脈充盈♿️，註射時針頭盡量采取與尾部平行的角度進針。開始註射時宜少量緩註，如無阻力🙎，表示針頭已進入靜脈👩🏻🎨，這時用左手指將針和尾一起固定起來，解除對尾根部的壓迫後，便可進行註射🧑🏼🦰。如有白色皮丘出現，說明未穿刺入血管，應重新向尾部方向移動針頭再次穿刺◼️。註射完畢後把尾部向註射側彎曲以止血。如需反復註射，盡量從尾的末端開始。一次的註射量為0.1～0.2ml/10g體重🪯。
豚鼠的靜脈註射🥹：一般采用前肢皮下靜脈。豚鼠的靜脈管壁較脆，註射時應特別註意↗️。
兔的靜脈註射🦸🏿♀️：一般采用外耳緣靜脈，因其表淺易固定。註射部位除毛🪟，用75％的酒精消毒，手指輕彈兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近心端，拇指繃緊靜脈的遠心端，無名指及小指墊在下面，右手持註射器📔，盡量從靜脈的遠端刺入血管，移動拇指於針頭上以固定，放開食、中指🤸♀️👊，將藥液註入，然後拔出針頭，用手壓迫針眼片刻以止血。
②經口給藥法
a.口服法💂🏽：把藥物放入飼料或溶於飲水中讓動物自動攝取🍉。
b.灌胃法🥒：灌胃法是用灌胃器將所應投給動物的藥灌到動物胃內。灌胃器由註射器和特殊的灌胃針構成或直接采用灌胃管。
鼠類的灌胃法：用左手固定鼠🤽♂️，右手持灌胃器𓀒，將灌胃針從鼠的口腔插入，壓迫鼠的頭部，使口腔與食道成一直線🕵🏿♀️，將灌胃針沿咽後壁慢慢插入食道，可感到輕微的阻力，此時可略改變一下灌胃針方向👮♀️，以刺激引起吞咽動作，順勢將藥液註入。常用灌胃量小鼠為0.2～1ml，大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml🐙。
③其他途徑給藥方法
a. 呼吸道給藥：呈粉塵、氣體及蒸汽或霧等狀態的藥物或毒氣🧑🏽⚖️，均需要通過動物呼吸道給藥🂠🦃。
b. 皮膚給藥：采用背部一定面積的皮膚脫毛後，將一定的藥液塗在皮膚上，藥液經皮膚吸收。
c. 脊髓腔內給藥📝：此法主要用於錐管麻醉或抽取腦脊液。
d. 腦內給藥：此法常用於微生物學動物實驗，將病原體等接種於被檢動物腦內，然後觀察接種後的各種變化。
e. 直腸內給藥：此方法常用於動物麻醉。
f. 關節腔內給藥：此法常用於關節炎動物模型的復製。
④實驗動物用藥量的確定及計算方法
人與動物的用藥量換算方法
a.人與動物對同一藥物耐受性不同，一般動物的耐受性要比人大🌂，單位體重的用藥量動物比人要高。必須將人的用藥量換算成動物的用藥量。一般可按下列比例進行換算：
人用藥量 1
小鼠、大鼠 25～50
豚鼠 15～20
b.按動物體表面積計算的方法🕸：
人的體表面積跟體重有關系，動物的體表面積也與體重有關系。動物的用藥量可以通過體表面積進行換算，公式如下：
A＝K×（W2／3／10000）
A＝體表面積🏈🎓，m2
W＝體重👩🏻🚒，ｇ
K＝常數：K小鼠📯、大鼠＝9.1 K豚鼠＝9.8 K人＝10.6
（2）實驗動物采血
① 大鼠🧛🏿♂️、小鼠的采血方法
a. 剪尾采血🙅🏼♂️。動物麻醉後，將尾尖剪去約5mm，從尾部向尾尖部按摩👳🏿♀️👩🏼🔬，血即從斷端流出🚴🏼♀️。也可用刀割破尾動脈或尾靜脈🧜🏽♂️，讓血液自行流出。采血結束後，消毒🌘、止血。用此法每只鼠可采血10余次。小鼠可每次采血約0.1ml👈🏼，大鼠約0.4ml。
b. 眼眶後靜脈叢采血🍃📳。左手拇指及食指抓住鼠兩耳之間的皮膚使鼠固定🤵🏼♂️，並輕輕壓迫頸部兩側🦅，阻礙靜脈回流，使眼球充分外突👩🦯➡️，提示眼眶後靜脈叢充血。右手持取血管🙎🏻♀️，將其尖端插入內眼角與眼球之間，輕輕向眼底方向刺入💆🏽♂️，當感到有阻力時即停止刺入❎，旋轉取血管以切開靜脈叢，血液即流入取血管中。采血結束後，拔出取血管，放松左手，出血即停止。用本法在短期內可重復采血🤷🏻♂️。小鼠一次可采血0.2～0.3ml🪄，大鼠一次可采血0.5～1.0ml。
c.（股）靜脈或頸（股）動脈采血。將鼠麻醉🪠，剪去一側頸部外側被毛，做頸靜脈或頸動脈分離手術⛵️，用註射器即可抽出所需血量。大鼠多采用股靜脈或股動脈🧑🏻⚖️，方法是❣️：大鼠經麻醉後，剪開腹股溝處皮膚，即可看到股靜脈✷，把此靜脈剪斷或用註射器采血即可✮，股動脈較深需先剝離，再采血。
d. 肝門靜脈采血。將鼠麻醉，無菌打開腹腔，找到肝門靜脈後，用帶有頭皮針的註射器緩緩抽取血液。一般大鼠可取血10ml左右🪛。
e. 摘眼球采血。此法常用於鼠類大量采血。采血時，用左手固定動物，壓迫眼球，盡量使眼球突出，右手用鑷子或止血鉗迅速摘除眼球🤛🏻，眼眶內很快流出血液。
② 豚鼠采血方法
a. 耳緣切口采血🎴。先將豚鼠耳消毒💳，用刀片沿血管方向割破耳緣，切口約長0.5cm，在切口邊緣塗上20％的檸檬酸鈉溶液，防止血凝，則血可自切口處流出。此法每次可采血0.5ml🤫。
b. 背中足靜脈采血。固定豚鼠，將其右或左後肢膝關節伸直，腳背消毒，找出足靜脈，左手拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手將註射針刺入靜脈，拔針後立即出血🎱。
c. 心臟采血。用手指觸摸🫧🎻，選擇心跳最明顯的部位🧑🏽🎄，把註射針刺入心臟，血液即流入針管👨🏻🚒。心臟采血時所用的針頭應細長些💐，以免發生采血後穿刺孔出血💱📊。
③ 兔的采血方法
a.耳緣靜脈采血❄️。將兔固定，拔去耳緣靜脈局部的被毛👩🦼➡️，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈擴張，用針頭刺耳緣靜脈末端，或用刀片沿血管方向割破一小切口，血液即流出。本法為兔最常用的采血方法🤦🏻♂️，可多次重復使用。
b.耳中央動脈采血🧑🏼🔧。在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動脈。用左手固定兔耳，右手持註射器🥷🏿，在中央動脈的末端，沿著與動脈平行的向心方向刺入動脈，即可見血液進入針管🤺。由於兔耳中央動脈容易痙攣，故抽血前必須讓兔耳充分充血，采血時動作要迅速。采血所用針頭不要太細，一般用6號針頭，針刺部位從中央動脈末端開始👨🏼🏭💁🏼，不要在近耳根部采血。
c.頸靜脈采血。方法同小鼠、大鼠的頸靜脈采血。
d.心臟采血。使家兔仰臥，穿刺部位在第三肋間胸骨左緣3mm處，針頭刺入心臟後4️⃣，持針手可感覺到兔心臟有節律的跳動▪️。此時如還抽不到血，可以前後進退調節針頭的位置，註意切不可使針頭在胸腔內左右擺動🖋，以防弄傷兔的心、肺。
（3） 實驗動物的處死
當實驗中途停止或結束時，實驗者應站在實驗動物的立場上以人道的原則去處置動物🌾，原則上不給實驗動物任何恐怖和痛苦👨🏼🦲，也就是要施行安樂死💻。實驗動物安樂死方法的選擇取決於動物的種類與研究的課題。
① 大鼠和小鼠
a. 頸椎脫臼法🫵🏽。右手抓住鼠尾用力向後拉👩🏽🏫，同時左手拇指與食指用力向下按住鼠頭🖖。將脊髓與腦髓拉斷🙎🏻♂️，鼠便立即死亡。
b. 斷頭法。用剪刀在鼠頸部將鼠頭剪掉，鼠立即死亡。
c. 擊打法⇾。右手抓住鼠尾，提起🤽♀️，用力摔擊其頭部🛼，鼠痙攣後立即死去；或用木錘用力擊打鼠頭部也可致死。
d. 急性大出血法𓀚。可采用鼠眼眶動脈和靜脈急性大量失血方法使鼠立即死亡🫃🏻📫。
e. 藥物致死法。吸入一定量的一氧化碳、乙醚🗯、氯仿等均可使動物致死🈷️。
② 豚鼠、家兔
a.空氣栓塞法👩🏿🦳。向動物靜脈內註入一定量的空氣🙆🏻，使之發生栓塞而死。
b.急性失血法。先使動物輕度麻醉，暴露股三角區，用鋒利的殺犬刀在股三角區做一個約10cm的橫切口，把股動🛗、靜脈全切斷，立即噴出血液🐙。用一塊濕紗布不斷擦去股動脈切口周圍處的血液和血凝塊🙌👩🏼🏭，同時不斷地用自來水沖洗流血，使股動脈切口保持暢通，動物在3～5min內即可致死⬅️。采用此種方法，動物十分安靜，對臟器無損傷🪯🫳，對活殺采集病理切片標本是一種較好的方法。
4、 關於善待動物的有關規定
（1） 倫理學原則
保證不用動物進行沒必要的試驗，只有在用其他替代技術嘗試失敗後才可以進行動物實驗，不給動物造成不必要的疼痛、不安或死亡🧑🏼🚀。使用實驗動物進行的任何科學研究都必須符合“3R”原則，並遵循本國的法律和指導方針。實驗動物必須采用統一許可的標準進行飼養管理，其建築設施📆、籠器具應舒適、安全👨🦽，同時，要重視動物的社會性及行為需求。
（2） “3R”原則
采用其他手段代替實驗動物，盡量減少實驗動物用量🦀，設法改良動物實驗方法以減少動物疼痛和不安。
①替代 主要包括用體外培養器官、組織、細胞等代替實驗動物🤽🏿♂️，用低等動物代替高等動物，用物理或化學方法代替動物實驗♜，或電腦模擬動物實驗🧑🎤。
②減少 盡可能地減少使用實驗動物的數量。
③優化 主要是指技術路線和手段的精細設計與選擇，使動物實驗得到良好的結果並減少實驗動物的痛苦。
（3） 按照國家意昂4部2006年9月30日頒發的“關於善待實驗動物的指導性意見”（國科發財字[2006]398號）的有關規定執行。
5、 異常毒性實驗操作規程
（1） 依據 中國獸藥典2015版（一部）附錄1141
（2） 原理 本法系指將一定劑量的供試品溶液註入小鼠體內,在規定時間內觀察小鼠死亡情況，判定供試品是否符合規定的一種方法🕵🏼。
（3） 試驗方法 尾靜脈註射
（4） 設備用具 電熱幹燥箱🧝🏻、鼠盒🙏🏻🚶🏻♂️、時鐘、鑷子、註射器(1ml)🤸🏼♂️、註射針頭(7# 、4#)75%乙醇棉球. 每次用完後的註射器、針頭清洗幹凈後,放入金屬製容器內,密閉置電熱幹燥箱中,用250℃加熱30分鐘🅿️。
（5） 供試品溶液的製備 按品種項下規定的濃度製成供試品溶液🥣。臨用前，供試品溶液應平衡至室溫𓀊🏊🏻。
（6） 實驗動物準備
實驗用小鼠應健康合格,在試驗前及試驗觀察期內，均應按正常飼養條件飼養,體重在18-22g,將稱好體重的小鼠分別平均使用,每批供試品5只,復試時用19-21g的小鼠,每批用10只🤺，做過本實驗的小鼠不得重復使用🧑🏻🔬。
（7） 操作方法
① 將各種實驗用具及供試品溶液按一定位置安排在工作臺上,鼠盒應標有供試品批號,日期的標簽🛐。
② 將註射器與註射針頭配套後,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液後排註射器內的氣泡,將準確調至所需量。
③ 捉小鼠時在其身後捏住尾巴,放入固定器內,將其尾巴露在外,用左手的拇指和中指拉直, 食指按在固定器上,使小鼠固定𓀚。
④ 用鑷子取75%乙醇棉球擦試小鼠尾巴,使靜脈擴張及消毒🌺。
⑤ 在尾長近尾尖1/4外用左手拇指及食指中指捏住尾巴,右手拿註射器,用針尖與尾巴成一適當角度(小於30°)刺入靜脈內,平行推入少許供試品溶液。
⑥ 立即將註射器內拴平行推入,在4-5秒鐘內勻速註入供試品溶液0.5ml,並記錄時間。規定緩慢註射的品種可延長至30秒🦜。如註射部位皮下發白,且推入藥液阻力很大,表示針頭未插入靜脈內🔃。若三次未註進或藥液損失大於0.02ml,應另取小鼠註射。
⑦ 註射完畢拔出針頭,隨即左手拇 指按住註射部位,並輕輕揉壓,使血液及溶液不致流出。
⑧ 立即將小鼠放開,將其在固定器內自由活動,以觀察即時反應,並作記錄,然後取出小白鼠放入標明批號組別的鼠盒內🐷。
⑨ 照上法繼續註射其它各鼠,在每次抽取供試品時均須將註射器內的回血用少量供試品溶液洗滌幹凈。
（7） 註意事項
① 註射完畢後拔出針頭時,如發現藥液外溢較多時,此小鼠應廢棄,另取小鼠依法操作。
② 試驗後,待觀察小鼠,餵養方法同試驗前🐙。
③ 實驗室及飼養室溫,一般控製在20-26℃🔸。
（8） 結果判定
非生物製品試驗🕴🏻，除另有規定外，全部小鼠在給藥後48小時內不得有死亡👭🏻♉️；如有死亡時📵，應另取體重19～21g的小鼠10只復試🐥，全部小鼠在48小時內不得有死亡，為符合規定。
生物製品試驗要求觀察7天🚴🏽♀️。觀察期內，小鼠應全部健存，且無異常反應，到期時每只小鼠體重應增加，判定供試品符合規定。如不符合上述要求🔹，應另取體重19～21g的小鼠10只復試1次1️⃣，判定標準同前。
6🛅、生物活性實驗操作規程
（1） 依據 中國獸藥典2015版（二部）黃芪多糖註射液生物活性測定
（2） 原理 本法系指將一定劑量的供試品溶液註入小鼠體內,在規定時間內觀察小鼠脾指數的變化情況，判定供試品是否符合規定的一種方法。
（3） 試驗方法 腹腔註射
（4） 設備用具 電熱幹燥箱、鼠盒、時鐘、鑷子、註射器(1ml)、註射針頭(7# 、4#)75%乙醇棉球. 每次用完後的註射器、針頭清洗幹凈後,放入金屬製容器內,密閉置電熱幹燥箱中,用250℃加熱30分鐘🙅🏼♂️。
（5） 供試品溶液的製備 按品種項下規定的濃度製成供試品溶液♞。臨用前，供試品溶液應平衡至室溫。
（6） 實驗動物準備
實驗用小鼠應健康合格,在試驗前及試驗觀察期內，均應按正常飼養條件飼養,體重在18-20g,將稱好體重的小鼠隨機分成兩組（給藥組和對照組），每組8～10只。
（7） 操作方法
① 將各種實驗用具及供試品溶液按一定位置安排在工作臺上,鼠盒應標有供試品批號,日期的標簽🧍🏻♂️🌘。
② 將註射器與註射針頭配套後,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液後排註射器內的氣泡,將準確調至所需量。
③用右手提起小鼠尾巴將其放在鼠籠蓋或其他粗糙表面上，在小鼠向前掙紮爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚🧑🏻🌾，將小鼠置於左手掌心🧑🦼🍿，無名指和小指夾其背部皮膚及尾部，即可將小鼠完全固定。
④小鼠腹部用酒精棉球擦拭消毒，然後在左或右側腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進約0.5cm，再使針頭與皮膚呈45°角方向穿過腹肌刺入腹腔🧎♀️，此時有落空感👩🏻✈️，回抽無腸液🕢、尿液後🕵🏻♂️，緩緩推入藥液。
⑤給藥組每鼠腹腔註射供試品0.5ml，對照組每鼠腹腔註射生理鹽水0.5ml，連續註射7日🤬，每日1次，於最後一次註射24小時後，將動物處死，稱體重，取脾稱重，計算平均脾指數。
（8） 註意事項
①試驗後,待觀察小鼠,餵養方法同試驗前🙍。
②實驗室及飼養室溫,一般控製在20-26℃🪛。
（9） 結果判定
生物活性給藥組與對照組平均脾指數的差值應≥2。
脾指數＝脾重（mg）/體重（g）
平均脾指數＝組內脾指數總和/組內動物數
7、 過敏反應實驗操作規程
（1） 依據 中國獸藥典2015版（一部）附錄1147
（2） 原理 本法系指將一定劑量的供試品溶液註入豚鼠體內,間隔一定時間後靜脈註射供試品進行攻擊🙎🏻♀️，觀察動物出現過敏反應的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應。
（3） 試驗方法 靜脈/腹腔註射
（4） 設備用具及用具洗滌消毒
① 設備用具:電熱幹燥箱🪡、鼠盒、時鐘🐻❄️、鑷子、註射器(1ml)、註射針頭(7# 🚣♀️、4#)、鼠籠、75%乙醇棉球。
② 用具洗滌消毒
註射器及註射針頭用水及蒸餾水沖洗幹凈後，放入金屬製容器內，密閉置電熱幹燥箱內250℃ 30分鐘即可☺️。
（5） 實驗動物準備
實驗用豚鼠為清潔級DH豚鼠，體重在250-350g,雌鼠應無孕。做過實驗的豚鼠不得重復使用𓀝，每批供試品需6只豚鼠。
（6） 操作方法
① 腹腔註射
a. 將各種實驗用具及供試品溶液按一定位置按排在工作臺上,豚鼠籠上應標有供試品批號,日期的標簽🧖🏽♂️。
b. 將註射器與註射針頭配套後,用少量供試品溶液洗滌三次,棄去洗液,取供試品溶液後排盡註射器內的氣泡並準確調至所需量🧳。
c. 由另外一人用抓起豚鼠，令其仰臥，選腹部部左側一個位置先用75%乙醇棉球擦拭後，右手持註射器於豚鼠左側皮下刺入，先不註射，將註射器內拴往回拉一下，內有氣泡時證明針頭在腹腔內，這時把0.5ml供試品註入進去並記錄時間，在註射後15分鐘內觀察豚鼠的藥理反應♙，照此法共註射6只豚鼠👨🏻🎨。
d. 連續3次，隔日腹腔註射供試品溶液0.5ml🍘👷🏼，進行致敏。每日觀察每只動物的行為和體征🧙🏼，首次致敏和激發前稱量並記錄每只動物的體重👰🏼♀️。然後將其均分為2組，每組3只，分別在首次註射後第14日和第21日🚏，由靜脈註射供試品溶液1ml進行激發。觀察激發後30分鐘內動物有無過敏反應症狀🙍♂️。
② 靜脈註射
a. 把豚鼠固定好，用75%乙醇棉球把手擦幹凈，將豚鼠耳朵擦拭幹凈，選耳輪廓靜脈註射，右手持註射器,針尖與耳朵成一適合角度（小於30度）刺入靜脈內，平行推註少許供試品溶液🙍🏻。
b. 立即將註射器內拴平行推入,在4-5秒鐘內勻速註入供試品溶液1ml,並記錄時間,如註射部位皮下發白,且推入藥液阻力很大,表示針頭未插入靜脈內🌙。若三次未註進或藥液損失大於0.02ml,應另取小豚鼠註射。
c. 註射完畢拔出針頭,隨即左手拇 指按住註射部位,並輕輕揉壓,使血液及供試品溶液不致流出👩🏿🍳。
d. 立即將豚鼠放入鼠籠內，以觀察即時反應,30分鐘後🧑🦯➡️🧕🏻，即可判定供試品是否合格。
③ 結果判定
靜脈註射供試品溶液30分鐘內👩🏽✈️，不得出現過敏反應。如在同一只動物上出現豎毛、發抖、幹嘔、連續噴嚏3聲🙎🏽、連續咳嗽3聲🧑🏻、紫癜和呼吸困難等現象中的2種或2種以上，或出現二便失禁♾💆🏿、步態不穩或倒地📝、抽搐🔱、休克、死亡現象之一者⛹️♀️，判定供試品不符合規定。
8、 熱原實驗操作規程
（1） 依據 中國獸藥典2015版（一部）附錄1142
（2） 原理 本法系指將一定劑量的供試品溶液註入家兔耳緣靜脈內,觀察家兔體溫變化的情況，以判定供試品是否具有熱原。
（3） 試驗方法 耳緣靜脈註射
（4） 實驗材料及用具
a. 天平 0.01 m g 或 0.lmg🤍、0.l m g 或 l m g、10g
b. 電熱幹燥箱🧭，250℃ 以上，受熱均勻🌴。
c. 恒溫水浴
d. 熱原測溫儀或肛門體溫計👨🏽🌾，精度 0.1℃ 。
e. 家兔固定盒🍳， 盒兩側有通氣孔🐱。
f. 實驗用具:註射器♥︎、燒杯🟧🧑、三角瓶、大稱量瓶🐙、吸管💁🏻♂️、移液管✫、表面皿、 玻璃棒、廣口試劑瓶🌅、直鑷、金屬製密封器（ 均需除熱原）、時鐘🙇🏿♂️、脫脂棉或細軟衛生紙💁🏽🫕。
g. 試劑 75%乙醇、凡士林或50%甘油、生理鹽水👱🏽♂️、滅菌註射用水（ 經細菌內毒素檢查👲🏼，含細菌內毒素低於0.25EU/ml)、無熱原氯化鈉（經250℃ 30分鐘或 200℃ lh 或 180℃ 2h加熱除熱原）⇒✊🏻。
（5） 實驗動物的準備
①供試用家兔 供試用的家兔應健康合格🤏🏽🚴🏻♂️，體重1.7kg以上（用於生物製品檢查用的家兔體重為1.7～3.0kg） ，雌兔應無孕。
② 新兔預選
a. 預測體溫前7日即應用同一飼料飼養，在此期間內，體重應不減輕⏪，精神、食欲⤵️、排泄等不得有異常現象🪣。未曾用於熱原檢查的家兔或供試品判定為符合規定，但組內升溫達0.6℃的家兔；或3周內未曾使用的家兔，均應在檢查供試品前7日內預測體溫🏋🏻♂️，進行挑選。
b. 測量體溫時，測溫儀探頭或肛門溫度計插人肛門的深度各兔應相同約 6cm ,測溫時間不得少於 1.5min🗜👈🏻。
c. 每隔 30min測溫1次🧑🚒，共8次。
d. 8次體溫均在38. 0～39. 6℃ (—般多選用38. 4～39. 4℃) 的範圍內🏄🏼，且最高最低體溫差數不超過0. 4 ℃的家兔♦︎，可供 3 周內實驗用✅。
e. 錄選新兔編號🧑🏻🚀、 登記入兔史記錄卡， 未被錄選家兔⛔️， 可飼養7日再預測體溫1次，如仍不符合要求則淘汰🧖🏽。兔史記錄卡內容應包括日期、體重👍🏿、性別、供試品名、正常體溫、 溫差、結果。
③ 家兔的重復使用
a. 供試品判定為符合規定的家兔，至少應休息48h，方可供下一次實驗用。
b. 供試品判定為需復試的家兔，應暫作休息處理，如復試合格，升溫 >0.6℃ 的家兔🚣🏻♂️，
應休息2周以上，重新測溫挑選後使用。
c. 供試品判定為不符合規定的家兔，不再使用。
d. 對血液製品、抗毒素和其他同一過敏原的供試品在5天內可重復使用1次。
④ 復試 用家兔挑選體重相近、體溫相對穩定、正常體溫溫差小，平均值在38. 8～39. 2℃🥌、 使用次數少的家兔進行實驗🧘🏽♀️。使用過抗原性藥品的家兔應避免使用。
（6） 實驗前的準備
① 測溫儀或肛門溫度計每3～6個月校驗一次，如有異常隨時校驗，不符合要求者不能使用。
② 用具的除熱原 清洗幹凈的玻璃器皿🐑、註射器🧑🍳、針頭🤦、直鑷等放入金屬製容器內， 密閉， 置電熱幹燥箱中經250℃ 30min 以上或200℃ l h 以上或 180℃ 2h 以上加熱除熱原。控溫時間應從達到規定溫度時開始計時。去除熱原未曾開啟的密封容器內用具👩🦽，可供一周內使用。
③ 實驗室和飼養室準備
熱原檢查前1～2日，供試用家兔應盡可能處於同一溫度的環境中👩🏿🍳，實驗室和飼養室的溫度相差不得大於3℃，且應控製在17～25℃，在試驗全部過程中👨🏼🍼，實驗室溫度變化不得大於3℃，應防止動物騷動並避免噪聲幹擾👸🏼。家兔在試驗前至少1小時開始停止給食並置於寬松適宜的裝置中，直至試驗完畢。測量家兔體溫應使用精密度為±0.1℃的測溫裝置。測溫探頭或肛溫計插入肛門的深度和時間各兔應相同🫲🏻，深度一般約6cm，時間不得少於1.5分鐘，每隔30分鐘測量體溫1次🏊♀️，一般測量2次🤜🏼，兩次體溫之差不得超過0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫🐆🖨。當日使用的家兔，正常體溫應在38.0～39.6℃ 的範圍內，且同組各兔間正常體溫之差不得超過1.0℃🔛。
（7） 檢査方法
① 選符合規定的家兔，停止給飼料，稱重後置於家兔固定盒內至少 lh🚇，頭部固定應寬松適宜，以適用於體重不同的動物。
② 每隔30min 測量家兔體溫1次，一般測量2次，兩次體溫之差不得超過 0. 2℃，不作修約， 以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。平均值計算後修約保留三位有效數字👩🏻🦼➡️， 如38.9℃，39.0℃ 平均38.95℃，修約至39.0℃。（ 如按《 英國藥典》 檢查， 可保留四位有效數字如38.95 )。
③ 當日使用的家兔，正常體溫應在 38.0～39.6℃範圍內☂️，且同組各兔間相差不得超過1℃。
④ 每個供試樣品用家兔3只， 在測定正常體溫後 15min 內給藥。
a. 供試品的劑量，應按各該品種項下的規定註射🐳，緩慢註射的藥液💻，註射速度（除另有規定外）一般為每兔 4～5min，每分鐘4～8ml 。
b. 供試品註射的體積，按家兔體重每千克不小於0.5ml，不大於10ml。供試品溶液溫熱至約 38℃ 後註射🥨， 必要時可用無熱原氯化鈉調節滲透壓。
c. 供試品製備完畢後應在30min內註射於家兔體內（個別品種因給藥體積過大,可能超過 30min )🚑。
d. 註射前先用75%乙醇棉球輕擦耳靜脈的註射部位，從耳緣靜脈耳尖端進針👏🏿，如進針不利，應順序向前進行。
e. 註射完畢👨🏿⚖️，拔出針頭時，按住針孔下端數秒鐘，止血。
⑤ 給藥後每隔30分鐘測量體溫1次🚴🏿🫲🏽，共6次。體溫值可保留三位有效數字🏊♀️。
⑥ 溫差計算
a. 註射藥液後，每隔30分鐘按前法測量其體溫1次，共測6次🥎，以6次測得體溫中最高的一次減去正常體溫，為該兔體溫的升溫值🐃，計算3只家兔體溫升高總和。如6次體溫均低於正常體溫，則升溫值以“0”計。
b. 6次體溫中最低的一次🧔♀️，減去正常體溫🈷️，即為降溫值🤽🏻♀️。
（8） 結果判斷
① 判斷復試
a. 初試3只家兔中僅有1只體溫升高0. 6℃或高於 0. 6℃， 或3只家兔升溫均低於0. 6℃ 但升溫的總數達1. 3℃或高於1. 3℃（生物製品規定1. 4℃或1. 4℃以上）💂🏻♀️，應另取5只家兔復試🪴。
b. 3 只家兔升溫值均為0🧑🧒🧒，其中有1只降溫值>0. 6℃👉🏿，或3只家兔中有2只降溫值在0.5℃，防止降溫影響熱原檢查⏰🏋🏿，可考慮在消除降溫的影響因素後（ 如動物體溫波動異常👨🏿🔧、室溫變化、註射速度🛡、測溫異常等 ) 另取 3只家兔重試🧑🏿🦰。
② 判斷合格
a. 初試3只家兔中🍭，體溫升高均低於0.6℃，並且3只家兔升溫總和低於1.3℃ (生物製品為 1.4°C) 可判斷為符合規定。
b. 復試5只家兔中✢，體溫升高0. 6℃或高於0. 6℃的家兔數不超過1只， 並且初復試合並，8只家兔的體溫升高總和為3. 5℃或低於3. 5℃ ，可判斷為符合規定。
③ 判斷不合格
a. 初試3只家兔中，體溫升高0. 6℃或高於0. 6℃的家兔數有2只或3只,可判斷為不符合規定。
b. 復試的5只家兔中🤾🏻♂️， 體溫升高0. 6℃或高於0. 6℃的家兔有2只或多於2只， 可判斷為不符合規定🐏。
c. 初復試合並8只家兔的升溫總數超過3. 5℃ ，可判斷為不符合規定。
用於熱原檢查後的家兔，如供試品判定為符合規定🧑🤝🧑♥︎，至少應休息48小時方可再供熱原檢查用，其中升溫達0.6℃的家兔應休息2周以上𓀛。對用於血液製品👩🏿🍼、抗毒素和其他同一抗原性供試品檢測的家兔可在5天內重復使用1次🚴🏽♀️。如供試品判定為不符合規定👩🏿🚒，則組內全部家兔不再使用。
（9） 靈敏度測試和適用性研究
① 實驗用兔靈敏度測試每年應不定期隨機抽取體重和使用次數不同的實驗用兔按熱原檢查法要求註射5EU/kg或10EU/kg內毒素標準品，應得到不符合規定的結果。
② 熱原檢查適用性研究對未規定熱原檢查限值劑量的藥品👨🏿⚖️，可根據該藥的藥理性質， 在不影響家兔正常生理的前提下👨🏻🔬，按體重計算（ 人按60kg計），為人用每千克體重每小時最大供試品劑量的2～5倍(化學藥品一般為2～3 倍，中藥為3～5倍）。在為新品種建立熱原檢測標準時，建議進行適用性試驗👩🦰，即設限值劑量的供試品組🫳🏻，10EU/kg內毒素組與含 10EU/kg 內毒素的供試品組🫵🏼， 三組同時進行熱原檢査試驗🔐， 前者應無異常反應並符合規定👍🏿， 後兩者應判斷為不符合規定♤。